MS-級 Thermo Scientific Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是一種胰蛋白酶和 LysC 的質(zhì)譜 (MS) 級絲氨酸胞內蛋白酶混合物，與單獨使用胰蛋白酶相比，可以同時(shí)酶切蛋白以實(shí)現更有效的酶切。

MS 級 Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物的特點(diǎn)包括：
?增強酶切 — 酶組合可減少胰蛋白酶缺失切割
?便利 — 胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶以?xún)?yōu)化的比值提供，以組合使用形式進(jìn)行酶切
?出色的選擇性 — 胰蛋白酶具有 >95% 的 C 端賴(lài)氨酸和精氨酸特異性；LysC 具有 >90% 的 C 端賴(lài)氨酸切割特異性
?穩定 — 酶混合物以?xún)龈尚问教峁?/span>

通過(guò) MS 以高效、可重現的蛋白酶切開(kāi)始進(jìn)行蛋白表征、鑒別和定量。盡管胰蛋白酶通常用于蛋白酶切，但單獨這一種蛋白酶并不足以完全酶切賴(lài)氨酸和精氨酸殘基的羧基端的蛋白。因此，Lys-C 蛋白酶通常與胰蛋白酶共同作用，以連續酶切蛋白，缺失切割較少。Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶的凍干混合物，已經(jīng)過(guò)優(yōu)化以提高蛋白酶切效率。它以 20 μg、5 x 20 μg 或 100 μg 靈活規格提供，也包括在 EasyPep Mini MS 樣品制備試劑盒中。

此混合物中 MS 級胰蛋白酶源自豬胰腺提取物，經(jīng) TPCK 處理以消除糜蛋白酶活性并甲基化以改善酶切期間的穩定性。MS 級 Lys-C 蛋白酶是一種從產(chǎn)酶溶桿菌中高度純化的天然酶。與胰蛋白酶不同，Lys-C 可以切割賴(lài)氨酸然后切割脯氨酸，是與其他蛋白酶配合使用實(shí)現較佳的蛋白酶切的理想選擇。當作為混合物使用時(shí)，根據酶與蛋白比值，酶切可在短短 1.5–3 小時(shí)內完成或者過(guò)夜。在 -20°C 下儲存時(shí)，該凍干酶混合物可保持穩定一年。

? 出色的選擇性—胰蛋白酶具有 >95% 的 C 端賴(lài)氨酸和精氨酸特異性；LysC 具有 >90% 的 C 端賴(lài)氨酸切割特異性
? 高純度—未檢測到胰凝乳蛋白酶活性（胰蛋白酶）
? 完全酶切—胰蛋白酶/LysC 酶組合可減少胰蛋白酶缺失切割
? 增強穩定性—胰蛋白酶經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾可降低自溶活性
? 便利—酶以穩定的凍干或液體形式提供

胰蛋白酶是一種源自豬胰腺提取物的質(zhì)譜 (MS) 級絲氨酸蛋白酶，特異性切割賴(lài)氨酸和精氨酸殘基的羧基側。該酶經(jīng)過(guò) TPCK 處理消除了糜蛋白酶活性，并通過(guò)甲基化進(jìn)行化學(xué)修飾，得到高活性和更穩定的酶形式。胰蛋白酶可耐受常用的部分變性條件，如 0.1 SDS、1 M 尿素和 10% 乙腈。Pierce 胰蛋白酶在 pH 7-9 范圍內活性較佳，在 pH < 4 條件下可逆失活。胰蛋白酶以 1 mg、5 包 20 μg 或 100 μg 的凍干粉和 100 μg 溶液的形式提供。

Lys-C 蛋白酶是從產(chǎn)酶溶桿菌中分離獲得的質(zhì)譜 (MS) 級絲氨酸蛋白酶。Lys-C 蛋白酶對賴(lài)氨酸殘基具有較高的活性和特異性，與胰蛋白酶（即較少的肽段）相比，肽段較大，樣品的復雜性較低。與胰蛋白酶不同，Lys-C 蛋白酶可以先切割賴(lài)氨酸然后切割脯氨酸，這使其適用于序列蛋白酶切，然后進(jìn)行胰蛋白酶酶切，以減少切割缺失。這些獨特的 Lys-C 蛋白酶特性可確保單獨使用或隨后進(jìn)行胰蛋白酶酶切時(shí)的高酶切效率。此外，Lys-C 原型肽通常具有較高的電荷狀態(tài)，使其成為 ETD 片段化的首選酶。

Lys-C 胰蛋白酶通常用于磷酸肽富集工作流程中，因為可在 N 和 C 端生成帶有伯胺的肽，可利用胺反應性同量異位標簽對片段進(jìn)行雙標記。這導致肽電離增強和定量限提高，因為在 MS3 采集期間可重新分離更多碎片離子。該酶可用于溶液內或膠內酶切工作流程，以產(chǎn)生用于 LC-MS/MS 蛋白鑒別的肽。

在 37°C 下可在 2 小時(shí)內完成高效蛋白酶切。在高度變性條件下（如 8 M 尿素、2 M 鹽酸胍、1% SDS、2% CHAPS 和 40% 乙腈），Lys-C 蛋白酶可保持活性，并在 pH 7–9 條件下充分發(fā)揮作用（pH 8 下活性最大）。該凍干酶的質(zhì)量為 30 kDa，在 –20°C 下儲存時(shí)可保持穩定 1 年。該 Lys-C 酶以?xún)龈尚问剑?0 μg 或 100 μg含量）包裝。

胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶的凍干混合物，已經(jīng)過(guò)優(yōu)化以提高蛋白酶切效率。盡管胰蛋白酶通常用于蛋白酶切，但單獨這一種蛋白酶并不足以完全酶切賴(lài)氨酸和精氨酸殘基的羧基端的蛋白。因此，Lys-C 蛋白酶通常與胰蛋白酶共同作用，以連續酶切蛋白，缺失切割較少。胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物以 20 μg、5 x 20 μg 或 100 μg 靈活規格提供。根據酶與蛋白比值，酶切可在短短 1.5–3 小時(shí)內完成或者最長(cháng)過(guò)夜完成。

胰凝乳蛋白酶、GluC、Asp-N 蛋白酶

? 增加序列覆蓋范圍—具有互補色譜、電離和片段化特性的重疊肽的蛋白表征結果較佳
? 高比活性—每種蛋白酶都具有極好的酶特異性
?穩定—以?xún)龈尚问教峁?/span>

Asp-N 蛋白酶是一種 MS 級鋅金屬蛋白酶，來(lái)源于莓實(shí)假單胞菌的突變菌株，需要痕量鋅來(lái)維持活性。Asp-N 蛋白酶主要在半胱氨酸氧化產(chǎn)生的天冬氨酸和半胱氨酸的氨基側切割。也可能在谷氨酸殘基切割；但是，谷氨?；鶜埢那懈盥曙@著(zhù)低于天冬氨酸殘基的切割率。在 37°C 條件下，Asp-N 蛋白酶可在 2–20 小時(shí)內高效酶切蛋白，活性大于 20,000 單位/mg 蛋白，在變性條件（如 1 M 尿素、2 M 鹽酸·胍、0.1% SDS、2% CHAPS 和 10% 乙腈）下仍可保持活性，在 pH 6–8 條件下具有較佳活性。該凍干酶的質(zhì)量為 27 kDa，在 -20°C 下儲存時(shí)可保持穩定 1 年。

Glu-C 蛋白酶也稱(chēng)為 V-8 蛋白酶，是從金黃色葡萄球菌中分離獲得的 MS 級絲氨酸蛋白酶。Glu-C 蛋白酶特異性切割碳酸氫銨和醋酸銨緩沖液中谷氨酸殘基的羧基側，產(chǎn)生少量的肽片段。在磷酸鹽緩沖液中也可能在谷氨酸和天冬氨酸殘基切割。在 37°C 條件下，Glu-C 蛋白酶可在 5–18 小時(shí)內高效酶切蛋白，活性大于 500 單位/mg 蛋白，在變性條件（如 2 M 尿素、1 M 鹽酸胍、0.1% SDS、2% CHAPS 和 20% 乙腈）下仍可保持活性。在 pH 8 條件下，Glu-C 蛋白酶活性較佳。該凍干酶的質(zhì)量為 27 kDa，在 -20°C 下儲存時(shí)可保持穩定 1 年。

胰凝乳蛋白酶是一種從牛胰腺中分離獲得的 MS 級胞內蛋白酶，特異性切割酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的羧基側。在牛胰腺中發(fā)現兩種主要形式的胰凝乳蛋白酶 A 和 B，其含量相等。它們是相似的蛋白質(zhì)（80% 同源性），但具有不同的蛋白水解特征。Thermo Scientific 胰凝乳蛋白酶有兩種形式的胰凝乳蛋白酶。由于胰蛋白酶可能與天然來(lái)源的胰凝乳蛋白酶共純化，Thermo Scientific 胰凝乳蛋白酶經(jīng) TLCK 處理以消除可能的胰蛋白酶活性，提高酶切特異性。胰凝乳蛋白酶可以耐受溫和的變性條件，如 0.1% SDS、2 M 尿素、2 M 鹽酸·胍、1% CHAPS 和 30% 乙腈，在 pH 7.5–8.5 條件下具有較佳活性。該凍干酶的質(zhì)量為 25 kDa，在 -20°C 下儲存時(shí)可保持穩定 1 年。